小鼠胰岛素(Insulin)说明书

2021年2月9日发(作者：裘皮大衣)

小鼠胰岛素

(Insulin)

酶联免疫分析（

ELISA

）

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用

目的：本试剂盒用于测定小鼠血清

,

血浆及相关

液体样本中胰岛素

(Ins ulin)

含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素

< p>
(Insulin)

水平。用纯化的小鼠胰岛素

( Insulin)

抗体包被微孔板，

制成固相抗体，

< p>
往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素

(Insulin)

< br>，再

与

HRP

标记的胰岛素

(Insulin)

抗体结合，形成抗体

-

抗原

-

酶标抗体复合物，经过彻底洗涤 后

加底物

TMB

显色。

TMB

在

HRP

酶的催化下转 化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄

色。颜色的深浅和样品中的胰岛素

< p>
(Insulin)

呈正相关。用酶标仪在

450 nm

波长下测定吸光度

（

OD

值）

，通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素

(I nsulin)

含量。

试剂盒组成

：

试剂盒组成

说明书

封板膜

密封袋

酶标包被板

标准品：

18 mIU/L

标准品稀释液

酶标试剂

样品稀释液

显色剂

A

液

显色剂

B

液

终止液

浓缩洗涤液

48

孔配置

1

份

2

片（

48

）

1

个

1

×

48

0 .5ml

×

1

瓶

1.5ml

×

1

< br>瓶

3 ml

×

1

瓶

3 ml

×

1

瓶

3 ml

×

1

瓶

3 ml

×

1

瓶

3ml

×

1

瓶

（

20ml

×

20

倍）×

1

瓶

96

孔配置

1

份

2

片（

96

）

1

个

1

×

96

0 .5ml

×

1

瓶

1.5ml

×

1

< br>瓶

6 ml

×

1

瓶

6 ml

×

1

瓶

6 ml

×

1

瓶

6 ml

×

1

瓶

6ml

×

1

瓶

（

20ml

×

30

倍）×

1

瓶

保存

2-8

℃保存

2-8

℃保存

2-8

℃保存

2-8

℃保存

2-8

℃保存

2-8

℃保存

2-8

℃保存

2-8

℃保存

2-8

℃保存

样本处理及要求

：

1.

血清：

室温血液自然凝固

10-20

分钟，

离心

20

分钟左右

（

2000-3000

转

/

分）

。仔 细收集上

清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.

血浆：应根据标本的要求选择

E DTA

、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合

10-20

分钟后，

离心

20

分钟 左右（

2000-3000

转

/

分）

。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该

再次离心。

3.

尿液：用 无菌管收集，离心

20

分钟左右（

20 00-3000

转

/

分）

。仔细收集上清，保存过程

中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参 照实行。

4.

细胞培养上清：检测 分泌性的成份时，用无菌管收集。离心

20

分钟左右（

2000-3000

转

/

分）

。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用

PBS

（

PH7.2-7.4

）稀释细胞悬液，细胞

1

浓度 达到

100

万

/ml

< br>左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心

20

分

钟左右（

2000-3000

转

/

分）

。仔细收集上清。保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。

5.

组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的

PBS

，< /p>

PH7.4

。用液氮迅速冷冻保存备

用。 标本融化后仍然保持

2-8

℃的温度。加入一定量的

< p>
PBS

（

PH7.4

）< /p>

，用手工或匀浆器

将标本匀浆充分。离心

20

分钟左右（

2000-3000

转

/

分）

。仔细收集上清。分装后一份待

检测，其余冷冻备用。

6.

标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上

进行试验，可将标本放于

-20

℃保存，但应避 免反复冻融

.

7.

不能检测含

NaN3

的样品，因

NaN3

抑制辣根过氧化物酶的（

HRP

）活性。

< p>

操作步骤

1.

标准品的稀释与加样：在酶标包 被板上设标准品孔

10

孔，在第一、第二孔中分别加标

准品

100

μ

l

，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液

50

μ

l

，混匀；然后从第一孔、第二

孔中 各取

100

μ

l

分别加到第三孔和第四孔，

再在第三、

第四孔分别加标准品稀 释液

50

μ

l

，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取

50

< br>μ

l

弃掉，再各取

50

μ

l

分别加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液

50ul

，混 匀；混匀后从第五、第六孔中各

取

50

μ

l

分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准 品稀释液

50

μ

l

，混

匀后从第七、第八孔中分别取

50

μ

l

加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

品稀释液

50

μ

l

，混匀后从第九第十孔中各取

50

μ< /p>

l

弃掉。

（稀释后各孔加样量都为

50

μ

l

，

浓度分别为

12 mIU/L

，

8.0 mIU/L

，

4.0 mIU/L

，

2.0 mIU/L

，

1.0 mIU/L

）

。

2.

加样：分别设空白孔（空白对照 孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

、待测样

品孔。< /p>

在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液

40

μ

l

，

然后再加待测样品

10

μ

l

（

样

品最终稀释度为

5

倍）

。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

3.

温育：用封板膜封板后置

37

℃温育

3

0

分钟。

4.

配液：将

30

（

48T

的

20

倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水

30

（

48T

的

20

倍）倍稀释后备用。

5.

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置

3 0

秒后弃去，如此

重复

5

次，拍干。

6.

加酶：每孔加入酶标试剂

50

μ

l

，空白孔除外。

7.

温育：操作同

< br>3

。

8.

洗涤：操作同

< br>5

。

9.

显色：每孔先加入显色剂

A50

μ

l

，再加入 显色剂

B50

μ

l

，轻轻震荡混匀，

37

℃避光显色

15

分钟

.

10.

终止：每孔加终止液

50

μ

l

，终止反应（ 此时蓝色立转黄色）

。

11.

测定：以空白空调零，

450nm

波长依序测量各孔的吸光度（

OD

值）

。

测定 应在加终止

液后

15

分钟以内进行。< /p>

注意事项：

1

．

试剂盒 从冷藏环境中取出应在室温平衡

15-30

分钟后方可使用，酶 标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

2

．

浓洗涤 液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3

．

各步加 样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好

控制在< /p>

5

分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

< br>

4

．

请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本

OD< /p>

值

大于标准品孔第一孔的

OD

< p>
值）

，请先用样品稀释液稀释一定倍数（

n

倍）后再测定，计

算时请最后乘以总稀释倍数（×

n

×

5

）

。

2

5

．

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6

．

底物请避光保存。

7

．

严格按 照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准

.

8

．

所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9

．

本试剂不同批号组分不得混用。

10.

如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

计算：

以标准物的浓度为横坐标，< /p>

OD

值为纵坐标，

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释

倍数；或用标准物的浓度与

OD

值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的

OD

值

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释

倍数，即为样品的实际浓度。

试剂盒性能：

1.

< br>样品线性回归与预期浓度相关系数

R

值为

0.95

以上。

2.

批内与批见应分别小于

9%

和

11%

检测范围：

8.0 mIU/L -15 mIU/L

保存条件及有效期：

1.

< p>
试剂盒保存：

；

2-8

℃ 。

2

．有效期：

6

个月

3

（此图仅供参考）

Mouse Insulin

FOR RESEARCH USE ONLY

Drug Names

Generic Name

：

Mouse Insulin ELISA Kit.

Purpose

This kit allows for the determination of Insulin concentrations in Mouse serum, tissue and

other biological fluids.

Principle of the assay

T

he kit assay Mouse Insulin level in the sample, use Purified Mouse Insulin antibody to

coat

microtiter

plate

wells,

make

solid-phase

antibody,

then

add

Insulin

to

wells,

Combined

Insulin

antibody

which

With

HRP

labeled,

become

antibody

-

antigen

-

enzyme- antibody

complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue

color

At

HRP

enzyme- catalyzed,

reaction

is

terminated

by

the

addition

of

a

sulphuric

acid

solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm.

The concentration of Mouse Insulin in the samples is then determined by comparing the O.D. of

the samples to the standard curve.

4