(完整版)细胞信号转导研究方法

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细胞信号转导途径研究方法

一、

蛋白质表达水平和细胞内定位研究

1

、

信号蛋白分子表达水平及分子量检测

: Western blot analysis.

蛋白质印迹法是将蛋白质混合样品经

SDS-PAGE

后

,

分离为不同条

带， 其中含有能与特异性抗体

(

或

McAb )

相应的待检测的蛋白质

(

抗原蛋

白

)

，将

PAGE

胶上的蛋白条带转移到

NC

膜上此过程 称为

blotting

，以

利于随后的 检测能够的进行，随后

,

将

NC

膜与抗血清一起孵育，使第一

抗体与待检的抗原决定簇结合

特异大蛋白条带

)

，再 与酶标的第二抗体

反应

,

即检测样品的 待测抗原并可对其定量。

基本流程：

检测示意图：

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2

、免疫荧光技术

Immunofluorescence

（

IF

）

免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，

先将已知的抗原或抗体

标记上荧光素制成荧光标记物，再用这种荧光抗体 （或抗原）作为分子

探针检查细胞或组织内的相应抗原

（或抗体 ）

。

在细胞或组织中形成的抗

原抗体复 合物上含有荧光素，利用荧光显微镜观察标本，荧光素受激发

光的照射而发出明亮的荧光

（黄绿色或桔红色）

，

可以看见荧光所 在的细

胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质、定位，以及利用定量技术测定

采用 流式细胞免疫荧光技术（

FCM

）可从单细胞水平检测不同细胞

亚群中的蛋白质分子，用两种不同的荧光素分别标记抗不同蛋白质分子

< br>的抗体，可在同一细胞内同时检测两种不同的分子（

Double IF

）

，也可

用多参数流式细胞术对胞内多种分子进 行检测。

二、

蛋白质与蛋白质相互作用的研究技术

1

、

免疫共沉淀

（

Co- Immunoprecipitation, Co-IP

）

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Co-IP

是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的

“

protein A

”能特异性地结合到免疫球蛋白的

< br>FC

片段的现象而开发出

来的方法。

目前多用精制的

protein

A

预先结合固化在

agarose

的

b eads

上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，

beads

上的

prorein A

就能