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药物单次给药毒性研究技术指导原则
一、概述
急性毒性（
Acute toxicity
）是指药物在单次或
24
小时内多次给予后
2]
一定时间内所产生的毒性反应
[1
、
。
狭义的单次给药毒性研究
（
Single dose
toxicity study<
/p>
）是考察单次给予受试物后所产生的急性毒性反应
[2]
。本指
导原则所指为广义的单次给药毒性研究，
可采用单次或
24
小时内多次给
药的方
式获得药物急性毒性信息。
拟用于人体的药物通常需要进行单
次给药毒性试验（见注释
1
）
。单
次给药毒性试验对初步阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重
要意义。单次给药毒性试验所获得的信息对重复给药毒性试验的剂量设
计和某些药物临
床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一
些与人类药物过量所致急性中毒相
关的信息
[1]
。
本指导原则适用于中药、天然药物和化学药物。
二、基本原则
（一）试验管理
用于支持药品注册的
单次给药毒性试验必须执行《药物非临床研究
质量管理规范》
（
GLP
）
。
（二）具体问题具体分析
单次给药毒
性试验的设计，应该在对受试物认知的基础上，遵循“具
体问题具体分析”的原则。
—
1
—
对于化学药，应根据受试物的结构
特点、理化性质、同类化合物情
况、适应症和用药人群特点、试验目的等选择合适的试验
方法，设计适
宜的试验方案，并结合其他药理毒理研究信息对试验结果进行全面的评
价。
对于中药和天然药物，还应考虑到其
与化学药的不同特点，试验时
应根据各自不同的情况进行针对性设计。
< br>
（三）随机、对照、重复
单
次给药毒性试验应符合动物试验的一般基本原则，即随机、对照
和重复。
三、基本内容
（一）受试物
中药、天然药物：受试
物应采用能充分代表临床试验拟用样品和
/
或
< br>上市样品质量和安全性的样品。应采用工艺路线及关键工艺参数确定后
的工艺制备
，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理
由。应注明受试物的名称、来
源、批号、含量（或规格）
、保存条件、有
效期及配制方法等，
并提供质量检验报告。由于中药的特殊性，建议现
用现配，否则应提供数据支持配制后受
试物的质量稳定性及均匀性。当
给药时间较长时，应考察配制后体积是否存在随放置时间
延长而膨胀造
成终浓度不准的因素。如果由于给药容量或给药方法限制，可采用原料
药进行试验。试验中所用溶媒和
/
或辅料应
标明名称、标准、批号、有效
期、规格及生产单位。
—
2
—
化学药物：受试物应采用工艺相对稳定、纯度和杂质含量能反映临
床
试验拟用样品和
/
或上市样品质量和安全性的样品。受试物应注
明名
称、来源、批号、含量（或规格）
、保存条件、有效期及配
制方法等，并
提供质量检验报告。
试验中所用溶媒和
/
或辅料应标明名称、
标准、
批号、
有效期、规格和生产单位等，并符合试验要求。
<
/p>
在药物研发的过程中，若受试物的工艺发生可能影响其安全性的变
化，应进行相应的安全性研究。
化学药物试验过程中应进行受
试物样品分析，
并提供样品分析报告。
成分基本清楚的中药、天
然药物也应进行受试物样品分析。
（二）实验动物
[1
、
3
、
4]
1.
种属
：不同种属的动物各有其特点，对同一受试物的反应可能会
有所不同。从
充分暴露受试物毒性的角度考虑，采用不同种属的动物进
行试验可获得较为充分的安全性
信息。因此，对于化学药，单次给药毒
性试验应采用至少两种哺乳动物进行试验，一般应
选用一种啮齿类动物
和一种非啮齿类动物。若未采用非啮齿类动物进行试验，应阐明其合
理
性。对于中药、天然药物，根据具体情况，可选择啮齿类和
/
或非啮齿类
动物进行试验
[
参见附录（二）
]
。
<
/p>
实验动物应符合国家对相应等级动物的质量规定要求，并具有实验
动物质量合格证明。
2.
性别
：通常采用两种性别的动物进行试验，雌雄各半。若采用单
性别动物
进行试验，应阐明其合理性。
—
3
—
3.
年
龄
：通常采用健康成年动物进行试验。如果受试物拟用于或可
能
用于儿童，必要时应采用幼年动物进行试验。
4.
动物数
：应根据动物种属和研究目的确定所需的动物数。动物数
应符合试验方法及结果分析评价的需要。
5.
体重
：试验中的每批动物初始给药时的体重差异不宜过大，啮齿
类动物初始给药时体重不应超过或低于平均体重的
20%
。
（三）给药途径
给药途径不同，受试物的吸收速度、吸收率和暴露量会有所不同。
通常情况下给药途径应至少包括临床拟用途径。
如不采用临床拟用途径，
应说明理由。
（四）试验方法与给药剂量
[1
、
3
、
4]
单次给药毒性试验的重点在于观察动物出现
的毒性反应。单次给药
毒性试验的试验方法较多，
常用的试验方
法有近似致死量法、
最大给药量法、
最大耐受量法、固定剂量法
、上下法（序贯法）
、累积剂量法（金字塔法）
、
半数致死量法等。应根据受试物的特点选择合适的方法，根据不同的试验
方法
选择合适的剂量（注释
2
）
。
原则上，给药剂量应包括从未见毒性反应的剂量到出现严重毒性反
应的剂量，或达到最大给药量。
不同动物
和给药途径下的最大给药容量可参考相关文献及根据实际
情况来确定。
< br>
—
4
—
根据所选择的试验方法，必要时应设置空白和
/
或溶媒（辅料）对照
组。
考虑到
胃内容物会影响受试物的给药容量，而啮齿类动物禁食时间
的长短会影响到受试物的肠道
内吸收和药物代谢酶活性，从而影响毒性
的暴露。因此，动物经口给药前一般应进行一段
时间的禁食，不禁水。
（五）观察时间与指标
[1
、
3
、
< br>4
、
5]
给药后，一般连续观察至少
14
天，观察的间隔和频率应适
当，以便
能观察到毒性反应的出现时间及恢复时间、动物死亡时间等。如果毒性
反应出现较慢或恢复较慢，应适当延长观察时间。
观察指标包括临床症状（如动物外观、行为、饮食、对刺激的反应、
分泌物、排泄物
等）
、死亡情况（死亡时间、濒死前反应等）
、体重变化
（给药前、观察期结束时各称重一次，观察期间可多次称重，动物死亡
或濒死时应称重）等。记录所有的死亡情况，出现的症状以及症状的起
始时间、严重程度
、持续时间，体重变化等。
所有的试验动物应进行大体解剖。
试验过程中因濒死而安乐死的动
物、死亡动物应及时进行大体解剖，其他动物在观察期结
束后安乐死并
进行大体解剖。当组织器官出现体积、颜色、质地等改变时，应进行组
织病理学检查。
—
5
—
在一些情况下，为获得更为全面的
急性毒性信息，可设计多个剂量
组，观察更多的指标，如血液学指标、血液生化学指标、
组织病理学检
查等，以更好地确定毒性靶器官或剂量反应关系
[
2
、
5]
。
四、结果分析与评价
（一）根据所观
察到的各种反应出现的时间、持续时间及严重程度
等，分析各种反应在不同剂量时的发生
率、严重程度。对观察结果进行
归纳分析，判断每种反应的剂量－反应及时间－反应关系
。
（二）判断出现的各种反应可能涉及的组织、器官或系统<
/p>
[
参考附录
（一）
]
等。
（三）根据大体解剖中肉眼
可见的病变和组织病理学检查的结果，
初步判断可能的毒性靶器官。应出具完整的组织病
理学检查报告，检查
报告应详细描述，尤其是有异常变化的组织。对于有异常变化者，应
附
有相应的组织病理学照片。
（四）
说明所使用的计算方法和统计学方法，必要时提供所选用方
法合理性的依据。
（五）根据各种反应在不同剂量下出现的时间、发生率、剂量
-
反应
关系、不同种属动物及实验室的历史背景数
据、病理学检查结果以及同
类药物的特点，判断所出现的反应与药物的相关性。判断受试
物引起的
—
6
—
毒性反应性质、严重程度、可恢复性以及安全范围；根据毒性可能涉及
的部位，
综合大体解剖和组织病理学检查的结果，
初步判断毒
性靶器官。
单次给药毒性试验的结果可作为后续毒理试验剂量
选择的参考，也
可提示一些后续毒性试验需要重点观察的指标。
五、名词解释
最大给药量（
Maximal feasible dose<
/p>
，
MFD
）
：<
/p>
指动物单次或
24
小时
< br>内多次（
2~3
次）给药所采用的最大给药剂量。
最大耐受量（
Maximal
tolerance dose
，
MTD
）
：是指动物能够耐受的
而不引起动物死亡的最高剂量。
半数致死量（
Median
lethal dose
，
LD
50<
/p>
）
：预期引起
50%
动物死亡的
剂量，该值是经统计学处理所推算出的结果。
六、参考文献
1
．
CDER, FDA.
Guidance for industry: single dose acute toxicity
testing
for pharmaceuticals
(Final).1996.
2
．
C
HMP
，
ons and answers on the
withdrawal of the “Note
for guidance on
single dose toxicity”.2010
.
3
．
Cordier A.
Single dose toxicity: Industry perspectives. In:
P.F. D’Arcy
and D.W.G
.
Harron edited, Proceedings of the First
International Conference
on
Harmonization. Brussels: 1991,189-191.
—
7
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