-
1.
首先
需要明确
，
DEPC
（
焦碳酸二乙酯）
是一种油状液体，跟水难容。故配置时室温通风橱
中完成，常常需要放置
过夜。
DEPC
在高压下会分解为
CO2
和乙醇，
所以，
如果你的
DEPC
水是用来处理实验器具的，
就不能高压；如果你的
DEPC
水是用来配制试剂的，
那么你就可以高压。不过不管你配制
DEPC
水的目的是什么，
在配制
DEPC
水时的双蒸水都不需要高压灭菌，因为即便是你
用来
处理器具，在泡过
DEPC
水之后
还必须要经过高压灭菌滴。
泡实验
器具的
DEPC
水的配制（
0.1%<
/p>
）
：
1000ml
双蒸水中加
1mlDEPC
，放在
1
000ml
容量
瓶中静置
4
小时后或过夜备用。保存方法：封闭冷藏备用。
最好分装小瓶来用，尽量避免
污染。
毕竟搞一次也不容易。
配试剂的
DEPC
水的配制
（
0.1%
）
：
100ml
盐水瓶内装
40ml
双
蒸水，
加
40ulDEPC
，
37
℃过
夜，高压处理
121c
，
25min
DEPC
分解成二氧化碳和酒精，封闭冷藏备用。
最好分装小瓶
来用，尽量避免污染。
搞一次也不容易。
2.
焦碳酸二乙酯（
DEPC
）
DEPC
即
diethyl pyrocarbonate
。分子式为
C6H10O5
，分
子量为
162.14
，无色、澄清透明的液体。是
一种强烈但不彻底的
RNA
酶抑制剂。它
通过和
RNA
酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性
，
从而抑制酶的活性。
DEPC
可以抑制植
物细胞上的
NSCC
，是常用的
NSCC
抑制剂
.
DEPC
毒性
1
．
DEPC(diethypyrocarbonate
，焦碳酸
二乙酯
)
是一种高效烷化剂。
DEP
C
不稳定，在
水溶液中会分解成乙醇和二氧化碳，
155
℃时也会分解。
DEPC
遇到氨水会发生反应产生氨
基甲酸乙酯。
2
．
DE
PC
有刺激性，对眼睛和气道粘膜有强刺激，在操作中应尽量在通风
的条件下进行，
DEPC
毒性并不是很强，但吸入的毒性是
最强的，使用时戴口罩，不小心沾
到手上注意立即冲洗。
3
．
DE
PC
是一种潜在的致癌物质，主要是能生成乙酯基衍生物和
乙酯
类衍生物，其中尿烷是一种已知的致癌物质。
DEPC
在水中的
半衰期
：
25
℃、磷
酸缓冲液中其半衰期为
4
min
（
pH
6
）
、
9
min
（
pH 7
）
< br>。
Tris
缓冲液中
DEPC<
/p>
的降解会加快，
25
℃时，半衰期为
1.25 min
（
pH
7.5
）
、
0.37
min
（
pH
8.2
）
。
DEPC
加入到水中之后并不会立即溶解，而是形成小的球状液滴（类似于油滴）
，需要
彻底搅拌直至液滴消失才算混合均匀。此时的溶液才可以拿去
高温除菌除
DEPC
。一般灭菌
15m
in
即可将
DEPC
彻底除去。
（
试验所用试剂也可用
DEPC
处理，
加入
DEPC
至
0.1%
浓度，
然后剧烈振荡
10
分钟，再煮沸
15
分钟
或高压灭菌以消除残存的
DEPC
，否则
DEPC
也能和
腺嘌呤作用而破坏
m
RNA
活性。
）
配置
加
0.1% DEPC
到去离子水中，混匀过夜，然后高温高压
121
℃，
20min
，
DEPC
即降
解成二氧化碳和水，无毒
。
< br>
用途
DEPC
是一种有效的核
酸酶抑制剂，它能够与很多酶的
-NH
，
-SH
或
-OH
等基团发生
反应，
从而破坏酶的活性位点。
一般，
常用浓度为
0.1%
（
1 L
水中加入
1 mL DEPC
）
的
DEPC
来作为
RNA
酶的抑制剂。比如，进行
RNA
实验时，要用
DEPC
处理实验所用的水和各种溶
液。
我们通常所说的
DEPC
（处理）水是
指用
DEPC
处理过并经高温高压消毒的
MiliQ
纯水。
DEPC
（处理）
水可以用于
RNA
沉淀的溶解，含有
R
NA
的各种反应体系如反转录、
siRNA
的退火等，以及其它各种要求无
RNase
、
DNase
和
proteinase
的反应体系。
使用注意事项
1
、
DEPC
可能溶解掉某些塑料枪头，因此，量取
DEPC
时要用玻璃器具
。
2
、
DE
PC
处理后的溶液要去除残余的
DEPC
，一般
121
℃灭菌
15
min
即可，也可以将其煮
沸
< br>15 min
以达到去除的效果。可能会残留些许气味，可以放心使用。
3
、因为
DEPC<
/p>
在
Tris
、
H
EPES
等缓冲液中极易分解，因此不能直接用
DEPC
来处理
Tris
、
H
EPES
等缓冲液。
这种情况下，
要先
用
DEPC
处理水，
然后再用
DEPC
处理过的水来配制缓
冲液。
4
、
Although
H2O prepared with reverse osmosis systems like
Milli-Q is free of RNases, it
can
be
contaminated
by
microbial
growth
if
the
machine
and
piping
are
not
well
maintained.
This
is
especially
problematic
in
centralised
water
systems
with
metres
of
piping.
5
、
The fruity
smell coming from ageing DEPC-containing solutions
stems from the esters
that are
generated when ethanol produced from hydrolysis
reacts with residual carboxylic
esters.
It is normal that some fruity smell lingers after
DEPC removal and is not necessarily
a
sign of incomplete DEPC hydrolysis.
安全问题及替代产品
DEPC is carcinogenic (it
carboxymethylates purines) and should be handled
with care.
Wear gloves!
Dimethylpropyl carbonate (DMPC), a
safer alternative to DEPC, is used in exactly the
same way.
3.
分子克隆第二版
343
页，上关于提取
RNA
所用的玻璃容器的处理方法，是用前
180
度
< br>干烤
8
小时或更长时间；另一种方法是
< br>0.1%
的
depc
水浸泡
(37
度
2
小时<
/p>
)
，然后灭菌水淋洗
数次，
100
度干烤
15
分钟，然
后高压灭菌除去
depc
.
我们实验室
一直是用
170
度考
4
小时，
且不准离人，不准过夜，可能是怕烤箱长时间高温，线路老化会发生危险
吧。
提取
RNA
所用的枪头，
EP
管。直接高压烘干即可。如果用
0.1
％
DEPC
处理
，要在
DEPC
配置后振摇
1
小时后再浸泡枪头，
EP
管方有效。我做的都是
将枪头泡在配制好的
depc
中，
摇振
过夜，
然后倒掉
depc
注意要到干净
，
再高压，
为了防止仍残留液体可
12
0
度干烤一会。
A.
对于提取
RNA
来说，我认为关键的一点在于实验器材
的准备
.
包括从最初的标本的制备，
保
存，
以及之后的试剂的准备，
匀浆器，
镊子，
tip
头的去除
RNase
处理，
尤其是去除
RNase
的
DEPC
处理步骤
B.
您在处死大鼠前，先准备好干净的冻存管
(
用
1.5ml
的
< br>Ep
管也可以，就是后面您在从液氮
中取出的时候容易爆
，您的注意安全
)
，然后将去除的骨骼肌立即用干净的剪刀分成
半颗到
一颗黄豆大小，装入冻存管后立即投入液氮保存
.
个人认为在这里使用装标本的管子没必要
用
D
EPC
处理
C.
在提取
RNA
之前，将试剂
(TR
Izol)
和器械
(tip
头，镊子，
匀浆器
)
都准备好
< br>D.
从液氮取出标本后，
立即转移进入事先加入
TRIzol
的匀浆器内
(
最好置冰上操作
)
，
立即匀
浆，一直到标本完全碾磨碎，这个时候
TRIzol
< br>液体成浑浊状，而且匀浆器的壁上没有太多
的黏附组织，然后将
< br>TRIzol
转出，继续后续的步骤。
1 Rnase
是一种蛋白酶，能够降解
RNA
。
2
我们的手上皮肤上有很多，应该是对我们的身体起保护作用。保护不被
RNA
病毒感染？
或者什么的。
3
这个酶高效稳定。
要么在
DEPC
水中处理
n
小
时，
要么在
160
度高温烘烤
6
小时。
此酶才
会失效
。
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