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讲座二
贫血的实验室诊断
原著
Professor
Michael J. Day
翻译：刘睿
兽医师（广州）
，校对：戴庶
兽医师（广州）
前言
如果
要对贫血动物做出成功的诊断和管理，
不可或缺一定水准的实验室检查。
血液学检查可
在院内做；或保存为
EDTA
抗凝血后，送检至商业诊断实验室。要进行基本的血液分析，最
低限度的实
验室设备应包括：
微量血细胞比容法离心机和毛细管判读器、
制
备染色血涂片的
材料、用于评估血涂片所用的显微镜。准备一台折射仪来测定血浆蛋白含
量也是有价值的。
如今，
临床实验室
已经有条件使用日趋精密的检测设备来进行血液分析。
虽然大部分的检测
设备能够获得可信的红细胞和白细胞数据，
但血小板的检测值可能被低估。
在使用仪器检测
血样的同时，
应配合血涂片
镜检。
本讲座回顾了红细胞参数的相关知识，
也包括血涂片检查
中可能遇见的各种红细胞形态学改变情况。
红细胞参数
红细胞计数，
PCV
和
Hb
红细胞压
积（
PCV
）是指红细胞总数
(RBC
s)
所占全血中的体积比。
PCV
测量
：通过离心微量
红细胞压积管后，人工判读数据，并记录为占血液总量百分比。血细胞压
积（
HcT
）通过自
动血液分析仪在细
胞大小和数量的基础上判定。
红细胞总数可使用自动化仪器，
或
血细胞计
数器在镜下计数来获得，用
RBC
×
1012
/l
表示。
血液中的血红蛋白（
Hb
）含量同样也可以使用自动化仪器判定，记录为
g/dl
。
Hb
（血红蛋
白）
的含量测定受血液样本中存在脂血症、
红细
胞溶解症或胆红素血的影响。
一个检验结果
精确性的简单方法：
3
×
Hb=
Ht
（血细胞压积）
。
检测到的数值要参照
“正常范围值”
来比较，
但要明确
“正常范围值”
并不适用于所有情况
。
举例来说，初生或者怀孕动物可能会呈现数值偏差，并且某些动物也存在品种效应（例
如，
视觉猎犬
(sight
hounds)
就呈现高
PCV
值和低嗜中性粒细胞计数）
。
PCV
，
RBC
计数和
HB
都
反映了红细胞质量，并且这三个参数之间通常具有相关性，所以简单的
测定
PCV
值即是一
个良好的临床指征
。
PCV
值通常被用于描述贫血的严
重程度。
犬
PCV
< br>近似参考值：轻度贫血
30-36%
，中度贫血
18-29%
，重度贫血
<18%
。
猫
PCV
近似参考值：轻度贫血
20-24%
，中度贫血
15-19%
，重度贫血
<14%
。
红细胞指数
红细胞指数由红细胞的各项参数计算得出，
它有效提供了红细胞的大小和血红蛋白浓度
的数
据。
平均红细胞容积（
MCV
）表示单个红细胞的体积，
MCV
计算公式：
PCV
×
10
RBC ×1012
/l
MCV
记录单位是“毫微微升”
（
fl
）
，当其数值上升时，预示“大红细胞症”
，其数
值下降时，
预示“小红细胞症”
。当血液样本被冷藏或邮寄至实
验室时，
MCV
数值可能会被人为升高。
大红细胞症也见于再生性贫血反应、叶酸缺乏、造血功能异常和部分
FeLV
（猫白血病病毒）
感染病例。小红细胞症是某些犬种（如日本秋田犬，沙
皮犬，柴犬）的正常现象，也可能是
缺铁反应或肝门静脉短路症。
平均红细胞血红蛋白含量
（
MCH
）是指单个红细胞中所含的血红蛋白量，单位是皮克（
pg
）
。
MCH
计算公式：
Hb
×
10
RBC ×1012
/l
MCH
值上升时，预示红细胞着色加深；其值下降时，预示红细胞着色变浅（最常见的原因
是铁元素缺乏）
。
平
均红细胞血红蛋白浓度
（
MCHC
）<
/p>
指血红蛋白在总红细胞数量中所占的百分比
（单位
g/dl
）
，
MCHC
计算公式：
Hb
×
100
PCV
仅当
MCHC
值下降时才具有临床意义，
因为在生理学中并不存在
M
CHC
值升高的现象。
MCH
值升高的
原因是与红细胞破裂、脂血症或出现海因茨小体有关的人为因素。
血涂片
制备一张优质血涂片对于贫血的诊断非常有必要。
通常将一滴用
EDTA
处理的血液滴在载
玻片上，用另一块载玻片连续而流畅地向前推动，涂片的尾部会出现“羽毛状的边缘”
。血
涂片经空气干燥后用
diff-quik
染色。
在血涂片的羽毛状尾部，血细胞呈单层分布，这个区域
适合在低倍和高倍镜下进行系统观测。所有细胞谱都应被评定。
红细胞形态学
正常的红细胞呈“两面
凹陷的圆盘状”
，中间为浅着色区。犬红细胞直径大约为
7mm
，猫红
细胞直径稍小（
6 mm)
。临床上可观察到一系列红细胞形态学变化，在评估血涂片的基础上
对此鉴别很重要，
因为它们提供了必要的诊断信息。
钱串红细胞
在纤维蛋白原浓度升高或球蛋白变性的高蛋白血浆中，红细胞常常堆砌在一起，形如
一串钱币。
这种现象在马的血液中属正常，在猫的血液中偶见。在犬上，
钱串红细胞通常发
生在炎症或肿瘤疾病中。
在红细胞凝集
（见下文）
的情况下，
鉴别钱串红细胞的结构
很重要。
红细胞凝集
红细胞凝集指红细胞的聚集（葡萄串状）
，这种情况也许可在
EDTA
处理的抗凝血中肉眼可
见或通过镜检发现。红细胞凝集
由抗体（通常为
IgM
）介导，并且强有力的指示了免疫介导<
/p>
的溶血性贫血。
红细胞大小不均等症
红细胞大小不均
等症简单说来就是出现了红细胞大小不一的变化，
正常血细胞中混有大红细
胞或小红细胞。
大红细胞通常呈多染色性，
并且可能
属于网织红细胞。
小红细胞是缺铁性贫
血的特征，在球形红细胞
症中（见下文）
，红细胞也比正常时小。
红细胞多染色性
红细胞多染色性是指
红细胞染色性质的变异，
通常出现浅蓝色的染色特征。
这些细胞
通常为
大红细胞，并且可能是网织红细胞。红细胞多染色性伴随
MCV
值上升时，强烈提示再生性
贫血反应。
< br>
红细胞低染
红细胞低染在镜
下可见到红细胞中央的浅着色区扩大，
这正如缺铁性贫血中可见的血红蛋白
浓度降低。
异形红细胞症
异形红细胞症简单说来就是红细胞的形状发生了异常变化。
球形红细胞症
球形红细胞指小而圆，
深染且中央浅着色区消失的红细胞。
球形红细胞是被部分吞噬的
红细
胞：被抗体
（和补体）
结合的红细
胞通过肝脏或脾脏时，附近的吞噬细胞移除了一部分的红
细胞膜。红细胞能“自我修复”
，并且继续以体积变小的红细胞存在于循环血液当中。
球形红细胞指示抗体的出现，
但是却不能辨别免疫介导性溶血症是原发
性，
或是继发性。
偶
尔情况下，球形红
细胞可能形成于非免疫介导性血管疾病。同时，球形红细胞在犬上易见。
但猫的红细胞正
常时体积偏小，所以不能确实分辨球形细胞。
裂红细胞
裂红细胞是伴随着红细胞外伤性裂解产生的细胞碎片。这种情况等同于出现了血管内阻塞
（例如寄生虫或血栓）
，这通常也是犬脾脏血管肉瘤的临床特征
。裂红细胞也可见于血管内
弥漫性凝血（
DIC
）
、充血性心力衰竭、淋巴瘤或肾小球性肾炎的情况。
棘红细胞
棘红细胞表示红细胞表面不
同位置出现不同长度的突起。
棘红细胞可能形成于红细胞膜的胆
固醇或磷脂异常，也可能是红细胞的机械性损伤（例如
DIC
或
血管肉瘤）
，偶见于淋巴瘤、
肝脏疾病、脾功能亢进或肾小球性
肾炎。
锯齿状红细胞
锯齿状红细胞表示红细
胞表面出现大面积短而平滑的突起。
通常是人为因素导致，
预示
EDTA
过量（当采血量没有达到采血管的标注容量时）
，但也偶见于新陈代谢异常（例如丙酮激酸
酶缺乏）或肾脏疾病。
嗜碱性彩斑
嗜碱性彩斑指示有
RNA
的残留物，在牛的血液中属正常，偶见于猫的贫血病例。这也是
犬
铅中毒的特征（铅通过破坏亚铁血红素和球蛋白合成，从而妨碍红细胞生成）
豪威尔氏体
豪威尔氏体是细胞核的残
留物，
在正常的猫血液中可见，
或见于对贫血的应答反应中。<
/p>
豪威
尔氏体也可在脾切除的动物血液中见到。
海因茨小体
海因茨小体是出现在红细
胞膜表面的变性血红蛋白聚集物，
最佳观测方式是配合使用活体染
色剂观察（
Leishman
’
s<
/p>
染色或新亚甲基蓝染色）
。正常猫血液中大约有
< br>5-10%
的红细胞含有
海因茨小体。当发生严重的氧化
损伤时，可能会出现相关的偏心细胞。
有核红细胞
有核红细胞并不存于正常血液中，
但
在再生障碍性贫血中常见，
随着对红细胞需求的
增加，
可从髓内或髓外的造血机制中被释放出来。
轻度骨髓基质损伤时也可能允
许释放有核
红细胞。健康的小型雪纳瑞犬和腊肠犬的循环血液中也可见一些有核红细胞。
红细胞寄生虫
在血涂片检查中，
可能发现一系列红细胞相关的病原生物。
在高寄生虫血症时，
大体型犬巴
贝斯虫尤其容易被发现。
小体型犬巴贝斯虫和表面支原体
（血液支原体）
通常难以发现，
PCR
实验对确诊此类感染具有高度敏感性。
血小板评估
血涂片用于血小板评估比
较准确，因为大部分的自动仪器会对血小板凝集效应的计数不准。
在血涂片中
（通常在边缘部分）
可见血小板凝集，
这也预示着
假性机器低读数。猫的红细胞
与血小板在体积上相似，
这也加大
了机器读数的误差。
血小板减少症需要用血涂片计算平均
血小板
值来判定：在
100
倍镜下（油镜头，即最终放大率为
1000
倍）
，取
10
个视野计数的
平均值。
猫：平均血小板值×
20=
血小板数×
109/l
犬：平均血小板值×
15=
血小板数×
109/l
白细胞评估
血涂片常用于手工白细胞
分类计数，通过测定一定数目白细胞内的各谱系细胞百分比来确
定。
通过血液分析仪或用血细胞计数板手工计数后，
各白细胞百分比数值需转化为绝对值
来
表示结果
(
×
109/l)
。
白细胞计数近似值，也可以通过镜下评估血涂片得出。平均白细胞计数方法：
4
0
倍物镜下，
取
10
< br>个视野中的平均计数值（即在
10
倍目镜下获得
400
倍的放大率）
，乘以
1500
，等于白
细胞数×
109
/l
。
白细胞形态学异常也要检查，
同时要评估杆状或早期粒细胞所占比例。
白细胞中的中毒颗粒<
/p>
物和空泡，以及非典型单核细胞的出现，这些也要熟悉判定。
网织红细胞计数
网织红细胞计数对确
诊再生性贫血反应是最为准确的。
在犬猫临床上，
网织红细胞过
多症与
红细胞多染性存在普遍关联。
网织红细胞仅能够通过活体
染色法
（例如新甲基蓝或亮甲酚蓝）
来辨别，这时聚集的核糖体
RNA
显露。网织红细胞在形态学上分集结状或点状。犬仅存在
集结状网织红细胞，但猫二者都有。
在犬上，
网织红细胞百分比
（在红细胞中）
需要表示为绝对值
(
×
109/l
)
。
网织红细胞计数
>60
×
109/l
是再生性贫血反应的象征，
>400
×
109/
表示显著的再生。
作为另外一个选择，网织红细胞生成指数
（
RPI
）也可能需要确定。
RPI<
/p>
对“校正”贫血程度
的评估和网织红细胞寿命有重要价值。
1
）贫血程度校正
校正值
%
（或计数值）
=
绝对值
%
（或计数值）×<
/p>
PCV
值
/<
/p>
正常
PCV
值
(45)
2
）网织红细胞寿命校正
RPI =
校正值
%
×
1<
/p>
/
血液成熟时间
血液成熟时间取决于
PCV
值：
PCV
45%
1
天
35%
1.5
天
25%
2
天
15%
2.5
天
RPI
>2.5
时，表示再生性贫血反应。
猫集结状网织红细胞最初从骨髓中被释放，
在经过
10-12
天的成熟期后，
转变为点状网织红
细胞。
相比之下，点状网织红细胞在循环血
液中出现需要
3-4
周。在猫上，集结状网织红
细胞计数可判定再生性贫血，
它反映骨髓再生活跃程度，
而点状红细胞计数代表累积再生贫
血。
集结状红细胞计数
>40
×
109/l
表示再生性贫血，
>200
×
1
09/l
时表示显著再生性贫血。
骨髓评估
对于非再生性贫血的病例，骨髓评估是诊断过程的一个重要步骤。可能需要采集两种样本
：
抽取骨髓内容物或用骨髓针穿刺活检。
前一种样本给临床病理
学专家分析，
而后一种样本给
组织病理学专家分析。
骨髓穿刺针的优点是病理组织可得到更好的评估，
但要获得优质的穿
刺活检物却具有挑战性。
将穿刺活检物放入福尔马林溶液固定之前先做
压片。
通常在股骨干
骨（猫）或髂骨嵴（犬）来获得样本。在大
型犬，肋骨或胸骨节是骨髓抽取的备用位置。
抽取的骨髓样本
应放入
EDTA
或
ACD
（可从采血袋中获得）抗凝血剂中保存，同时至少要制
备
10
张压片，
迅速空气干燥后染色。
主要的谱系细胞应该按照成熟程度、
所占的相对比例、
粒细胞
和红细胞比例的顺序依次确定。同时应该检测异常细胞（肿瘤细胞）
。
< br>
LECTURE 2.
LABORATORY DIAGNOSIS OF ANAEMIA
INTRODUCTION
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