PCR扩增过程中常见的问题及解决方法

PCR

技术具有高度的特异性、选择性、灵敏 性，而且快速、简便、易于自动化，因此在临

床医学工作中受到广泛的重视及合理的应用 。

目前在我国许多基层医疗单位均已相继开展

P

CR

研究用应用工作。

PCR

技术很简单，原理也很清楚，因此有条件的单位都能较顺利地

上马，但毕竟

PCR

技术是一种新生事物，受到许多条件因素的影响，所以要做得好也不容

易。在

PCR

技术应用过程中会遇到这 样或那样的问题，更甚至会得到与事实完成相反的结

果。为了使我们能够顺利地开展

PCR

工作，更好地发挥

PCR

多年来

PCR

工作总结的经验，对

PCR

扩增过程中经常出现 的一些问题进行简要的总结，

提供给广大科研工作者作为参考，抛砖引玉，不足之处欢迎 指正。

一、

假阳性扩增

在实验过程中有时会碰到所检验的样本全部阳性，

而且扩增产物电泳条带亮度均一，< /p>

这是扩

增系统受到污染时最典型的一种表现，需仔细检查，排除污 染源，一般应从以下步骤着手：

⒈

试剂污染：

厂方提供的试剂或其中的某种组分在出厂或运输、

贮存过程中受到污染。

检测方法，

可按试

剂盒说明书将试剂分装好，直接置 于

PCR

仪中扩增（不加阴性对照，可加适量蒸馏水），

便可简单而有效地判断试剂是否已受到污染。

⒉

实验室污染：

这是最常见的污染源，由于

PCR

技术可以在几个小时内将 模板中某些特异性序列扩增到数

百万倍以上，

扩弗产物可能在电 泳等过程中污染移液器、

操作台或随着蒸发所形成气溶胶而

污染 整个实验室。

扩增产物又是最有效的模板，

一旦出现产物污染其 污染程度都较严重。

判

断方法：

可以将 实验中最关键步骤如试剂分装、

样品处理等转移到一个新的环境中或转移到

超净工作台中完成。当然，所用的移液器、吸咀管（离心管）都应彻底更换。解决方法：实