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PCR
技术具有高度的特异性、选择性、灵敏
性，而且快速、简便、易于自动化，因此在临
床医学工作中受到广泛的重视及合理的应用
。
目前在我国许多基层医疗单位均已相继开展
P
CR
研究用应用工作。
PCR
技术很简单，原理也很清楚，因此有条件的单位都能较顺利地
上马，但毕竟
PCR
技术是一种新生事物，受到许多条件因素的影响，所以要做得好也不容
易。在
PCR
技术应用过程中会遇到这
样或那样的问题，更甚至会得到与事实完成相反的结
果。为了使我们能够顺利地开展
PCR
工作，更好地发挥
PCR
技术的工具作用，我们根据
多年来
PCR
工作总结的经验，对
PCR
扩增过程中经常出现
的一些问题进行简要的总结，
提供给广大科研工作者作为参考，抛砖引玉，不足之处欢迎
指正。
一、
假阳性扩增
在实验过程中有时会碰到所检验的样本全部阳性，
而且扩增产物电泳条带亮度均一，<
/p>
这是扩
增系统受到污染时最典型的一种表现，需仔细检查，排除污
染源，一般应从以下步骤着手：
⒈
试剂污染：
厂方提供的试剂或其中的某种组分在出厂或运输、
贮存过程中受到污染。
检测方法，
可按试
剂盒说明书将试剂分装好，直接置
于
PCR
仪中扩增（不加阴性对照，可加适量蒸馏水），
便可简单而有效地判断试剂是否已受到污染。
⒉
实验室污染：
这是最常见的污染源，由于
PCR
技术可以在几个小时内将
模板中某些特异性序列扩增到数
百万倍以上，
扩弗产物可能在电
泳等过程中污染移液器、
操作台或随着蒸发所形成气溶胶而
污染
整个实验室。
扩增产物又是最有效的模板，
一旦出现产物污染其
污染程度都较严重。
判
断方法：
可以将
实验中最关键步骤如试剂分装、
样品处理等转移到一个新的环境中或转移到
超净工作台中完成。当然，所用的移液器、吸咀管（离心管）都应彻底更换。解决方法：实
验室污染是
PCR
扩增过程中最易出现的现象，<
/p>
而且一旦出现污染，
消除污染源又极其困难，
往往需对整个实验室及实验器材彻底清洗处理，
所以应该以预防为主，
实验过程中严格遵守
实验基本要求，
样品处理与扩增
产物及电泳应尽量分开，
最好能在两个房间进行。
扩增前处
理所用的移液器及扩增后点样用的移液器应严格地分开，不可互换。
PCR
室应保持良好的
通风、清洁、最好能专用。
⒊
采样污染：
在实验过程中，有时会出现一批结果阳性率很高，一批结果阳性率又下降很多，如此反复，
这种现象大都是由于采样时污染所致，
一般来讲正规试剂生产厂家，
其试剂出厂时都要经过
严格的质量检测、批间，
特别是
批内差异都极小，
不致出现如此明显的反复，这种现象主要
是由
于收集样本的试管或吸管受到污染所致。
PCR
扩增非常敏感，
而一般实验室对重复使
用的试管所进行的洗涤方法往注不能去除痕量
DNA
，这些痕量
DNA
便成为<
/p>
PCR
模板，出
现阳性扩增结果，
由于采样试管受污染程度不一，
所以出现忽高忽低的现象解决方法建议
使
用一次试管及吸咀取样。
二、
假阴性扩增：
如果连续几次扩增结果都是阴性，
或已知阳性样本出现阴性扩增结果，
一般认为这是假阴性，
出现这现象有以下几种原因：
⒈
仪器故障：
出现全阴结果，
首先考虑到仪器运转是否正常。
正确判断仪器
的工作状况，
是排除假阴性其
它原因的基础，仪器运转是否正常
是
PCR
扩增最关键的步聚之一。判断仪器是否正常，首
先要测定加热体的温度是否准确，波动范围是否答合要求，各孔之间差异是否符合要求，
P
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