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蛋白酶抑制剂
破碎
细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程
中，需要加入蛋白酶
抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了
5
种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相
同，因
此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应
注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋
白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公
司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。
常用抑制剂
PMSF
PMSF
即
Phenylmethanesulfonyl f
luoride
，中文名为苯甲基磺酰氟。分子式为
C7H7F
O2S
，分子量为
174.19
，纯度
>99%
。
常用生化试剂，用于抑制蛋白酶
.
【配制方法】用异丙醇溶解
PMSF
成
1.74mg/ml
（
10mmol/
L
）
，分装成小份贮存于
-20
℃。如有必要可配成浓度高达
17.4mg/ml
的贮存液
（
100mmol/L
）
。
【注意
】
PMSF
严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通
过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了
PMSF
，应
立即用大
量水冲洗之。凡被
PMSF
污
染的衣物应予丢弃。
PMSF
在水溶液中不稳定。应在使用前从
贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。
PMSF
在水溶
液中的活性丧失速率随
pH
值的升高而加快，
且
25
℃的失活速率高于
< br>4
℃。
pH
值为
8.0
时，
20
μ
mmol/l PMSF
水溶液的半寿期大约为
8
5min
，
这表明将
PMSF
溶液调节
为碱性（
p
H>8.6
）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
蛋白水解酶抑制剂啊
!!!
实验室常用的啊
!!!
主要用于组织匀浆时用
!!
1)
抑制丝氨酸蛋白酶
(
如胰凝乳蛋白酶，胰蛋
白酶，凝血酶
)
和巯基蛋白酶
(
如木瓜蛋白酶
);
2)10mg/ml
溶于异丙醇中
;
3)
在室温下可保存一年
;
4)
工作浓度
:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);
< br>5)
在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的
PMSF
。
EDTA
1)
抑制金属蛋白水解酶
;
2)0.5mol/L
水溶液，
pH8~9;
3)
溶液在
4
℃稳定六个月以上
;
4)
工作浓度
:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);
5)
加入
NaOH
调节溶
液的
pH
值，否则
EDTA
不溶解。
胃蛋白酶抑制剂
(pepstantin)
l)
抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血
管紧张肽原酶，组织蛋白酶
D
和凝乳酶
;
2)1mg/ml
溶于甲醇中
;
3}
储存液在
4
℃一周内稳定，
-20
℃稳定
6
个月
;
4)1
作浓度
:0.7ug/ml(1um
ol/L)
5)
在水中不溶解。
亮抑蛋白酶肽
(leupeptin)
1)
抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木
瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶
B;
2)lOmg/ml
溶于水
;
3)
储存液
4
℃稳定一周，
-20
℃稳定
6
个月
;
4)
工作浓度
0.5mg/ml
。
胰蛋白酶抑制剂
(aprotinin)
1)
抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，
血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶
;
< br>2)lOmg/ml
溶于水，
pH7~8
3}
储存液
4
℃稳定一周，
-20
℃稳定
6
个月
;
4)
工作浓度
:0.06~2.0ug/ml(
0.01~0.3umol/L);
5)
避免反复冻融
:
6)
在
pH
>12.8
时失活。