常见蛋白酶抑制剂

模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统

广州赛诚生物基因表达调控专题

蛋白酶抑制剂

破碎细胞提取蛋白质的 同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋

白质不被降解。

需要加入蛋白酶

抑制剂

以防止蛋白水解。

以下列举了

5

因为各种蛋白酶对不同蛋白 质的敏感性各

不相同，

因此需要调整各种蛋白酶的浓度。

由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，

尤其

应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。

在宝灵 曼公

司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。

常用抑制剂

PMSF

1)

抑制丝氨酸蛋白酶

(

如胰凝乳蛋白酶，

胰蛋白酶

，凝血酶

)

和巯基蛋白酶< /p>

(

如木瓜蛋白

酶

);

2)10mg/ml

溶于异丙醇中

;

3)

在室温下可保存一年

;

4)

工作浓度

:17~174ug/ml(0. 1~1.0mmol/L);

5)

在水液体溶液中不稳定，必 须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的

PMSF

。

EDTA

1)

抑制金属

蛋白

水解酶

;

2)0.5mol/L

水溶液，

pH8 ~9;

3)

溶液在

4

℃

稳定六个月以上

;

4)< /p>

工作浓度

:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);

5)

加入

< br>NaOH

调节溶液的

pH

值，否 则

EDTA

不溶解。

胃蛋白酶抑制剂

(pepst

anti

n)

l)

抑制酸性

蛋白酶

如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶

D

和凝乳酶

;

2)1mg/ml

溶于甲醇中

;

3}

储存液在

4

℃

一周内稳定，

-20

℃

稳定

6

个月

;

4)1

作浓度

:0.7ug/ml(1umol/L )

5)

在水中不溶解。

亮抑蛋白酶肽

(leupeptin)

1)

抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋 白酶

B;

2)lOmg/ml

溶于水

;

3)

储存液

4

℃

稳定一周，

-20

℃

稳定

6

个月

;

4)

工作浓度

0.5mg/ml

。

胰蛋白酶抑制剂

(aprotini n)

1)

抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆 酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶

;

2)lOmg/ ml

溶于水，

pH7~8

3}

储存液

4

℃

稳定一周 ，

-20

℃

稳定

6

个月

;

4)

工作浓度

:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L);

5)

避免反复冻融

:

6)

在

pH>12.8

时失活 。

蛋白酶抑制剂混合使用

35ug/ml PMSF…………………………………

丝氨酸蛋白酶抑制剂

0.3mg/ml EDTA…………………………………

金属蛋白酶抑制剂

0.7ug/ml

胃蛋白酶抑制剂

(Pep statin)…………

酸性蛋白酶抑制剂

< br>0.5ug/ml

亮抑蛋白肽酶

(Leupeptin) ……………

广谱蛋白酶抑制剂

常用蛋白酶抑制剂表

抑制剂

Antipain

APMSF

靶蛋白酶

木瓜酶和胰酶

胰蛋白酶样丝氨酸

蛋白酶

抑肽酶

抑氨肽酶

B

Ⅱ

抑糜朊酶素

丝氨酸蛋白酶

氨基肽酶

半胱氨酸蛋白酶

)

胰凝乳蛋白酶

金属蛋白酶

EDTA

金属蛋白酶

有效浓度

50

μ

g/ml

10-40