hut-藏马
TBST
是什么？
TBST
中含有
Tris-Hcl
，
NaCl
，
tween20
这三种物质，
是做
WESTERN
BLOT
中常用的一种缓冲溶液
T<
/p>
ris-
B
uffered
S
aline and
T
ween 20
可作为缓冲液，也
可作洗涤液
（可用
TBST
洗涤缓冲液
的
全称
试什么？
< br>TBST
洗
NC
膜）
TB
S
T
是
TB
S
+
Tween
的缩写，
TB
S<
/p>
是
Tris-HCl
缓冲
盐
溶液
，
为等渗
盐
溶液
加
Tris-
HCl
缓冲液
用
1N HCl
调
pH
至
7.4
，
< br>Tween
为一种非离子型去污剂，
有复性抗原
的作用，
可提高特异性的识别能力。
用途：
Tris
缓冲液不仅被广泛用作
核酸<
/p>
和
蛋白质的溶剂
，还有许多重要用途。<
/p>
Tris
被用于不同
< br>pH
条件下的蛋白质晶体生长。
Tris
缓冲液的
低离子强度特点
可
用于线虫（
C. elegans
）核纤层蛋白（
lamin
）的中
间纤维的形成。
< br>
Tris
也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分
之一。
Tris
也被用作滴定标准物。
作为蛋白缓冲液时，
若
后续工作需要质谱，则不适宜用
Tris
，
最好换成其他质谱仪
可耐受的缓冲液。
Tris
中文别名：三
(
羟甲基
)
氨基甲烷
;
氨丁三醇
;
缓血酸铵
;
三羟甲
基氨基甲
烷
;Tris;
英文名称：
Tris(hydroxymethyl)aminoethane
分子式：
C4H11NO3
Tris-HCl
缓冲液（
0.05m
ol/L
，25℃）
TRIS
是一种最常用的生物缓冲液，常配成
PH<
/p>
值为
6.8
，
7
.4
，
8.0
，
8.8
。
其
PH
值随温度变化很大
。温度每升高一度，
< br>PH
值下降
0.03,
应注意<
/p>
温度对于
Tris
的
pKa
的影响。
。
1M TRIS-HCl
6.8
和
1.5M TRIS-HCl
8.8
是
SDS-
PAGE
最常用的试剂。
而由
TRIS
配成的
TAE
，
TBE
等是
DNA
电泳最常用的试剂，
TE
（
PH8.0
）
主要
用于溶解
DNA
。
TE
为
T
ris
加
E
DTA
的
合称。
缓冲特性：
Tris
为
弱碱
，在室温（
25
℃）下，它的
pKa
为
8.1
；根据缓
冲理论，
Tris<
/p>
缓冲液的有效缓冲范围在
pH
7.0
到
9.2
之间。
Tris
碱的水溶液
pH
在
10.5
左右
，
一般
加入
盐酸
以调节<
/p>
pH
值至所需值
，
即可获得该
pH
值的缓冲液。
衍生缓冲液：
由于<
/p>
Tris
缓冲液为弱碱性溶液，
DNA<
/p>
在这样的溶液中会
被去质子化，从而提高其溶解性。
人们常常在
Tris
盐酸
缓冲液中
加入
EDTA
制成
“
TE
缓冲液
”
，
TE
缓冲
液被
用于
DNA
的稳定和
储存
。
如
果
将
调
节
pH<
/p>
值
的
酸
溶
液
换
成
乙
酸
，
则
获
得
“
TAE
缓
冲
液
”
（
Tris/
Acetate
/EDTA
），
而
换
成
硼
酸
则
获
得
“
TBE
缓
冲
液
”
（
Tri
s/
Borate
/EDTA
）
。这两种缓冲液通常用于核酸
电泳
实验中。<
/p>
吐温为<
/p>
司盘
（
Span
，
山梨醇
脂肪酸酯
）和
环氧乙烷
的缩合物，为一类非离
子型去污剂。
化学名称
：
聚氧乙烯
失水山梨醇脂肪酸酯，简称
聚山梨酯
(Polysorbate
)
。
产品系列：
由于司
盘为山梨醇与不同高级脂肪酸所形成的酯，
故吐温实际上是同
类
型的系列产品
吐温
20
(TWEEN-20)
吐温
40
(TWEEN-40)
、
吐温
60
(TWEEN
-60)
吐温
80
(TWEEN-80
)
等等，根据不同的需要来选用。
吐温
-80
为
油酸
酯；
制备方法：山梨醇加热减压蒸馏，蒸出一定水分得失水山梨醇。将其
与
< br>油酸
酯化，得斯盘
80
。然后，
将斯盘
80
与环氧乙烷在碱催化下缩聚，得
到吐温
80
。
< br>吐温
-20
为
月桂酸
酯，为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧
乙烯双去水山梨醇单月
桂酸酯的混合物。
生产方法
主要采用加成法。以去水山梨醇单月桂酸酯（司盘
20
）和环
氧乙烷为原料，在氢氧化钠催化剂存在下，进行加成反应而得。
吐温
-60
为
硬脂酸
酯；
外观和性状：
淡黄色至琥珀色油状液体或膏状物，溶于水、
乙醇
、油脂等
。
原理：
由于
聚山
梨酯
分子中有较多的
亲水性
基团一
聚氧乙烯
基，故
亲水性强
< br>，为一种非离子型去污剂。
作用与用途：
1.
生物学实验中
< br>乳化蛋白
，在使用时，
Tween
和同类型的
Triton
X-1OO
(
聚乙二醇辛基苯基醚
)
非离子型去污
剂不破坏蛋白的结构，
可减少对
蛋白质之间原有的相互作用的破
坏。
而离子型去污剂如
SDS
则破坏蛋白的结构。
2.
在生物学实验中作
封闭
剂，封闭剂应该封闭所有未结合位点而
不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋
白的标委、也不与抗体或检测试剂有交
叉反应。
Tween-2
0
有复性抗原的作用，可提高特异性的识
别能力。
在做
westen
bl
ot
时，用惰性蛋白质或
非离子去污剂
结合位点，可以降低抗体的非特异性结合。
封闭
膜上的未
最常见的
封闭剂
是
BSA
、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和
T
ween-20
（
0.05
–
0.1%
）稀溶液。
3.<
/p>
常作为
水包油（
O/W
< br>）型乳化剂
，使其他物质均匀在溶液中分
散，主要用于农
药、食品、化妆品。
相对来说，吐温
20
更温和一
些，吐温
80
的乳化性更强
一些。
4.
药用：
（
1
）可作某些药物的增溶剂。
（
2
）有溶血作用，以吐温
-80
作用最弱。<
/p>
（
3
）水溶液加热后可产生混浊，冷后澄明，
不影响质量。
（
< br>4
）在溶液中可干扰抑菌剂的作用。
Triton
X-100(
聚乙二醇辛基苯基醚
)
是一种非离子型表面活性剂（或称去污
剂）
。它能
溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性
。免疫细胞
化
学中
Triton
X-100
常用浓度为
1%
和
0.3%
，其中
1%
的
Triton
X-100
常用于
漂洗组织标本，
0.3%
的
Tri
ton X-100
则常用于稀释血清，
0.1%
的
Triton X-100
常用于
LAMP
（环介导等温扩增）
，配制
< br>BSA
等。但通常是先配制成
30%
的
Triton
X-100
储备液，临用时稀释至所需浓度。
单去污剂裂解液
:
1mol/L Tris·
HCl
（<
/p>
pH8.0
）
2.5ml
NaCl 0.438g
TritonX-100 0.5ml
蒸馏水至
50ml
混匀后
4
℃保存。使用时，加入
PMSF
至终浓度为
100μg/ml
（
0.87ml
裂解液加入
1.74
mg/ml
PMSF50μl
）
。<
/p>
（一般实际用的比较多的其实是
RIP
A
裂解配方：
50 mM Tris-HCl pH
7.4
、
150 mM
NaCl
、
1
mM
PMSF
、
1 mM
EDTA
、
1% Triton x-100
< br>、
1%
脱氧胆酸钠、
0.1%
SDS)
2:
裂解细胞的步骤
:
常规胰酶消化
将胰酶吸出
加入培养基将细胞吹打起来
将细胞收
集到
EP
管中，离心
2000r/min
，
5min
。
用
PBS
洗三次，离心同上，弃上清
加入细胞裂解液（视细胞的数量
而定，一般每孔
100
～
150ul<
/p>
）
冰上孵育
5
～
10min
，离心
< br>12000r/min
，
5min
，收集上清。
3:triton
－
X100
Triton X-100
浓缩物由
SPI
Supplies
供应，
应用领域遍
及电子和光学显微镜、组
织学、清洁剂。
分子式
: C14H22O(C2H4O)n
乙烯氧基单位平均值为每分子
9
或
10
CAS NO: 9002-93-1
同义词
:
辛基苯酚
、聚氧乙烯辛基苯基醚
外观
:
液体
可溶解于
:
水、乙烷基异丙醇、
甲苯
、二甲苯和多数含氯溶液
pH
值
6.
0
至
8.0
;5%
的水溶液
.
30% Triton
X-100
的配制
试剂
Triton X-100 28.2ml
0.1mol/L
PBS(pH=7.3)
或
0.05mol/l
TBS(pH=7.4) 72.8ml
配制方法
取
Triton X-100
及
PBS
（或
TBS
）
混合，置
37
℃～
40
℃水浴中
2
～
3h
，使其充分溶解混
匀。用前取该储备液稀释至所需浓度。
< br>
在
生命科学
领域，该产品经常
被用于
水中帮助分解蛋白酶
；但是，必须使用尽可
能低的浓度否则会污
染样品，污染还会影响
MS
分析。
基因工
程中还用作
限制性内切酶
的缓冲液（
N
EBuffer EcoRI
）的成分之一
配比：
50
mM
NaCl,
100
mM
Tris-HCl
,
10
mM
MgCl2,
0.025%
Triton
X-100
（
pH
=7.5 T=25
℃）
该产品通常还作为聚合乳液的配方使用。