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hutTBST,tae,toween,tbe

作者:高考题库网
来源:https://www.bjmy2z.cn/gaokao
2021-01-28 16:45
tags:

hut-藏马

2021年1月28日发(作者:endless)



TBST


是什么?



TBST


中含有



Tris-Hcl




NaCl



tween20



这三种物质,


是做


WESTERN BLOT


中常用的一种缓冲溶液



T< /p>


ris-


B


uffered


S


aline and


T


ween 20


可作为缓冲液,也 可作洗涤液


(可用


TBST


洗涤缓冲液 的


全称


试什么?


< br>TBST



NC


膜)

< p>


TB


S


T



TB


S


+


Tween


的缩写,


TB


S< /p>



Tris-HCl


缓冲



溶液



为等渗



溶液



Tris- HCl


缓冲液




1N HCl


pH



7.4


< br>Tween


为一种非离子型去污剂,


有复性抗原


的作用,


可提高特异性的识别能力。






用途:


Tris


缓冲液不仅被广泛用作


核酸< /p>



蛋白质的溶剂


,还有许多重要用途。< /p>



Tris


被用于不同

< br>pH


条件下的蛋白质晶体生长。



Tris


缓冲液的


低离子强度特点


可 用于线虫(


C. elegans


)核纤层蛋白(


lamin


)的中


间纤维的形成。

< br>


Tris


也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分

< p>
之一。



Tris


也被用作滴定标准物。




作为蛋白缓冲液时,



后续工作需要质谱,则不适宜用


Tris



最好换成其他质谱仪


可耐受的缓冲液。





Tris



中文别名:三


(


羟甲基


)


氨基甲烷


;


氨丁三醇


;


缓血酸铵


;


三羟甲 基氨基甲



;Tris;





英文名称:


Tris(hydroxymethyl)aminoethane



分子式:


C4H11NO3



Tris-HCl


缓冲液(


0.05m ol/L


,25℃)




TRIS


是一种最常用的生物缓冲液,常配成


PH< /p>


值为


6.8



7 .4



8.0



8.8





PH


值随温度变化很大


。温度每升高一度,

< br>PH


值下降


0.03,


应注意< /p>


温度对于


Tris


pKa


的影响。







1M TRIS-HCl


6.8



1.5M TRIS-HCl


8.8



SDS- PAGE


最常用的试剂。





而由


TRIS


配成的


TAE



TBE


等是


DNA


电泳最常用的试剂,

TE



PH8.0



主要


用于溶解


DNA




TE




T


ris



E


DTA



合称。




缓冲特性:


Tris



弱碱


,在室温(


25


℃)下,它的


pKa



8.1


;根据缓


冲理论,


Tris< /p>


缓冲液的有效缓冲范围在


pH


7.0



9.2


之间。



Tris


碱的水溶液


pH



10.5


左右



一般


加入


盐酸


以调节< /p>


pH


值至所需值



即可获得该


pH


值的缓冲液。




衍生缓冲液:






由于< /p>


Tris


缓冲液为弱碱性溶液,


DNA< /p>


在这样的溶液中会


被去质子化,从而提高其溶解性。



人们常常在


Tris


盐酸


缓冲液中


加入


EDTA


制成



TE


缓冲液

< p>



TE


缓冲

< p>
液被


用于


DNA


的稳定和 储存









pH< /p>









< p>







TAE






Tris/


Acetate


/EDTA

),











TBE







Tri s/


Borate


/EDTA



。这两种缓冲液通常用于核酸


电泳


实验中。< /p>





吐温为< /p>


司盘



Span



山梨醇


脂肪酸酯


)和


环氧乙烷


的缩合物,为一类非离


子型去污剂。






化学名称







聚氧乙烯


失水山梨醇脂肪酸酯,简称


聚山梨酯


(Polysorbate )







产品系列:






由于司 盘为山梨醇与不同高级脂肪酸所形成的酯,


故吐温实际上是同


类 型的系列产品






吐温


20


(TWEEN-20)


吐温


40


(TWEEN-40)

< p>


吐温


60


(TWEEN -60)


吐温


80


(TWEEN-80 )


等等,根据不同的需要来选用。





吐温


-80



油酸


酯;



制备方法:山梨醇加热减压蒸馏,蒸出一定水分得失水山梨醇。将其


< br>油酸


酯化,得斯盘


80


。然后, 将斯盘


80


与环氧乙烷在碱催化下缩聚,得

到吐温


80



< br>吐温


-20



月桂酸

< p>
酯,为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧


乙烯双去水山梨醇单月 桂酸酯的混合物。



生产方法



主要采用加成法。以去水山梨醇单月桂酸酯(司盘


20


)和环


氧乙烷为原料,在氢氧化钠催化剂存在下,进行加成反应而得。



吐温


-60



硬脂酸


酯;







外观和性状:



淡黄色至琥珀色油状液体或膏状物,溶于水、


乙醇


、油脂等 。







原理:






由于


聚山 梨酯


分子中有较多的


亲水性


基团一


聚氧乙烯


基,故


亲水性强

< br>,为一种非离子型去污剂。






作用与用途:




1.


生物学实验中

< br>乳化蛋白


,在使用时,


Tween


和同类型的


Triton


X-1OO (


聚乙二醇辛基苯基醚


)


非离子型去污 剂不破坏蛋白的结构,


可减少对


蛋白质之间原有的相互作用的破 坏。



而离子型去污剂如


SDS


则破坏蛋白的结构。




2.


在生物学实验中作


封闭


剂,封闭剂应该封闭所有未结合位点而


不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋 白的标委、也不与抗体或检测试剂有交


叉反应。


Tween-2 0


有复性抗原的作用,可提高特异性的识


别能力。



在做


westen


bl ot


时,用惰性蛋白质或


非离子去污剂


结合位点,可以降低抗体的非特异性结合。



封闭


膜上的未


最常见的


封闭剂



BSA


、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和


T ween-20



0.05




0.1%


)稀溶液。






3.< /p>


常作为


水包油(


O/W

< br>)型乳化剂


,使其他物质均匀在溶液中分


散,主要用于农 药、食品、化妆品。


相对来说,吐温


20


更温和一


些,吐温


80


的乳化性更强 一些。






4.


药用:







1


)可作某些药物的增溶剂。







2


)有溶血作用,以吐温


-80


作用最弱。< /p>







3


)水溶液加热后可产生混浊,冷后澄明, 不影响质量。




< br>4


)在溶液中可干扰抑菌剂的作用。





Triton


X-100(


聚乙二醇辛基苯基醚


)


是一种非离子型表面活性剂(或称去污


剂)

。它能


溶解脂质,以增加抗体对细胞膜的通透性


。免疫细胞 化


学中


Triton


X-100


常用浓度为


1%



0.3%


,其中


1%



Triton


X-100


常用于

漂洗组织标本,


0.3%



Tri ton X-100


则常用于稀释血清,


0.1%



Triton X-100


常用于


LAMP


(环介导等温扩增)


,配制

< br>BSA


等。但通常是先配制成


30%


Triton X-100


储备液,临用时稀释至所需浓度。




单去污剂裂解液


:


1mol/L Tris·


HCl


(< /p>


pH8.0




2.5ml


NaCl 0.438g


TritonX-100 0.5ml


蒸馏水至



50ml


混匀后


4


℃保存。使用时,加入


PMSF


至终浓度为


100μg/ml



0.87ml


裂解液加入


1.74 mg/ml


PMSF50μl



。< /p>



(一般实际用的比较多的其实是


RIP A


裂解配方:


50 mM Tris-HCl pH 7.4



150 mM NaCl



1


mM PMSF



1 mM EDTA



1% Triton x-100

< br>、


1%


脱氧胆酸钠、


0.1% SDS)



2:


裂解细胞的步骤


:


常规胰酶消化



将胰酶吸出



加入培养基将细胞吹打起来



将细胞收 集到


EP


管中,离心



2000r/min



5min





PBS


洗三次,离心同上,弃上清



加入细胞裂解液(视细胞的数量 而定,一般每孔


100



150ul< /p>




冰上孵育


5



10min


,离心

< br>12000r/min



5min


,收集上清。



3:triton



X100




Triton X-100


浓缩物由


SPI Supplies


供应,



应用领域遍 及电子和光学显微镜、组


织学、清洁剂。






分子式


: C14H22O(C2H4O)n


乙烯氧基单位平均值为每分子


9


10





CAS NO: 9002-93-1





同义词


:


辛基苯酚


、聚氧乙烯辛基苯基醚






外观


:


液体






可溶解于


:


水、乙烷基异丙醇、


甲苯


、二甲苯和多数含氯溶液




pH



6. 0



8.0 ;5%


的水溶液


.



30% Triton X-100


的配制



试剂





Triton X-100 28.2ml





0.1mol/L PBS(pH=7.3)



0.05mol/l TBS(pH=7.4) 72.8ml



配制方法




Triton X-100



PBS


(或


TBS


) 混合,置


37


℃~


40


℃水浴中


2



3h

< p>
,使其充分溶解混


匀。用前取该储备液稀释至所需浓度。

< br>






生命科学


领域,该产品经常


被用于 水中帮助分解蛋白酶


;但是,必须使用尽可


能低的浓度否则会污 染样品,污染还会影响


MS


分析。






基因工 程中还用作


限制性内切酶


的缓冲液(


N EBuffer EcoRI


)的成分之一



配比:






50


mM


NaCl,


100


mM


Tris-HCl


,


10


mM


MgCl2,


0.025%


Triton


X-100



pH


=7.5 T=25


℃)






该产品通常还作为聚合乳液的配方使用。









hut-藏马


hut-藏马


hut-藏马


hut-藏马


hut-藏马


hut-藏马


hut-藏马


hut-藏马



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