injector-灰熊队
摘要】
黄酮类化合物是一类植物次生代谢产
物,因其在医药、食品及化工方面有着重要的
研究价值而得到了广泛关注。
各种用于研究黄酮类化合物的分离分析技术也在迅速发展,
薄
层色谱技术仍以其快速、
简便、
准确度高等优点而成为
鉴别黄酮类化合物的首选方法。
文章
综述了薄层层析技术在植物
黄酮类化合物中的应用。
【关键词】
黄酮类化合物;
薄层层析;
分离分析技术
Application of Thin
?layer
Chromatography in Flavonoids of Plants
TANG
Li
?juan
,
LIU
Wei
?wei
,
SHI
Da
?hua
,
ZHAO
Yue
?qiang
,
TAO
Chuan
?zhou
Dept. of
Chemical Engineering
,
Huaihai Institute of Technology
,
Lianyungang
222005
,
China
Abstract
∶
Flavonoids which
are a kind of secondary plant metabolites have
been
widely investigated for their
potential of medicine
,
food and chemical engineering. And
separation analysis technologies
applied in flavonoids are developing rapidly.
Thin
?layer
chromatography is
firstly selected in identification of flavonoids
for the rapid
,
simple and
highly accurate
advantages. Application of thin
?layer
chromatography in flavonoids of
plants
was reviewed in this paper.
Key
words
∶
Flavonoids
;
Thin
?layer
chromatography
;
Separation analysis
technologies
黄酮类化合物属植物多酚化合物,是植物次生代谢产物,该类化合物在医药、食品及化
工
方面有着重要的研究价值,
已报道其有抗氧化性、
抗炎抗菌、<
/p>
抑制血小板凝集及肥大细胞
组胺释放等作用,
在癌症及心脏病等疾患上也显示出治疗潜力,
因其在花色素中的存在而可
能用来代替毒性合成颜料[
1
]。黄酮类化合物的
来源主要有天然提取和人工合成两种。其
中天然提取的药物因副作用小而引起了人们更大
的研究兴趣。
随着植物源化合物的研究,
色
谱技术日益成为天然产物中生物活性成分分离纯化及分析的主要手段[
2
],薄层色谱
(
thin
?layer chromatography
,
TLC
)即薄层层析技术是发展较早的色谱方法之一,
其基本
原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或者分配等性能的不同,
使样品溶
液中各种物
质进行反复的吸附或者分配等作用,
从而将各种组分
分开。
尽管诸如高效液相色谱、
气相色
谱及色谱联用等现代色谱技术的广泛应用,
薄层色谱技术以其快速、
简便、
准确度高等优点
仍是现代实验室不可或缺的分析手段
,
在黄酮类化合物的研究中也被广泛应用。
本文综述了
薄层层析技术在植物黄酮类化合物中的应用进展。
1
TLC
用于黄酮类化合物定性研究
用薄层层析进行黄酮类化合物的定性研究,目前采用的
方法主要是与标准品或与文献对
照
Rf
值或将测试样品图谱与标准样品图谱相比较。
标准品和样品的
R
f
值、
斑点形状颜色及
有无荧光等特征
都完全相同,
则可作初步结论是同一化合物。
但一般需结合化学
反应或与紫
外光谱等方法联用加以确证。
卫星星
[
3
]
p>
在硅胶
G
薄层板上,
以醋酸乙酯
?
甲酸
?
水
(8
∶
3
< br>∶
1)
为展开剂、
1%
三氯化铝乙醇溶液显色后于紫外灯下观察,苦麦供试品与对照品芦丁
和
槲皮素相应的位置上显相同颜色的荧光斑点,
而阴性对照色谱无相同斑点显现。
从层析结
果可知苦麦籽壳提取物中主要含有芦丁和槲皮素两种黄酮类化合
物。朱贲峰等[
4
]以薄层
层析方法证
明江西修水和福建永春的青钱柳的主要黄酮类成分基本相同,
从而为对四氧嘧啶
糖尿病小鼠具有显著降血糖作用的青钱柳开发研究提供了有利的证据。该方法于硅胶
G
薄
层板上,以醋酸乙酯
?
甲酸
?
水
(8
∶
1
∶
1)<
/p>
为展开剂、
1%
三氯化铝乙醇溶液显色
时,于紫外
灯
(365 nm)
下检
视,两种样品均与对照品色谱相应的位置上,显黄色的荧光斑点。黄绍军
等[
5
]
对由
HPLC
法纯化的晶体以硅胶
GF254
,展开剂甲苯
?
氯仿
?<
/p>
丙酮(
40
∶
2
5
∶
35
)
进
行
TLC
分析,
其中一种结晶与槲皮素
Rf
值一致,
Rf=0.50
;
另一种结晶与山萘酚
Rf
值一
致,
Rf=0.72
;同时结
合熔点、液相色谱、红外光谱、核磁共振等分析方法进行结构表征,
证实荔枝叶含有黄酮
苷,其苷元为槲皮素和山萘酚。冯玛莉等[
6
]以薄层层析方法
建立了
沙棘黄酮的质量控制方法,即在硅胶
GF254
薄层板上,以甲苯
?
醋酸乙酯
< br>?
甲酸
(5
∶
< br>2
∶
1)
为展开剂,检出异鼠李
素、槲皮素;异鼠李素、槲皮素的
Rf
值分别为
0.60,0.49
。该鉴别方
法对应的样品色谱斑点
清晰,无拖尾、背景无干扰且重复性好。
虽然对于一个化合物来说,比移值
Rf
是一个特有
的常数。但在文献[
5
,
6
]中对照品均
采用了由中国药品生物制品检定所提供的槲皮素,而在不同的
色谱条件下槲皮素的
Rf
值分
别是
p>
0.50
和
0.60
,这就说明
Rf
值是受色谱条件即展开剂、吸附剂等因素影响
的,因此用
薄层层析进行定性分析样品和标准品应在同一薄层板、
同一条件下进行,
点样间隔时间不宜
过长。层析条件的选择对
结果是至关重要的。
2
精制
天然提取样品的纯化可以通过重结晶、柱层析等方法得到,其中薄层层析也是常用的简<
/p>
便方法。
但操作中需注意的是薄层板面积要大,
< br>点样量和硅胶量多的前提下才适合取样和刮
样。
Zhao
[
7
]研究组对采自新疆鹰嘴豆种子的硅胶柱层析得到的某些样品组分用硅胶薄
板层析进行
纯化后用以结构测试。刘玉红等
[
8
]对由聚酰胺柱层析得到的黄酮活性组分
进行硅胶
GF254
薄板
(100
mm×
200 mm)
层析,吹干后再加点数次,层析后刮下并
合并
Rf
值相同的色带,用乙醇溶解洗脱,得到各组分的溶液后
以
HPLC
鉴定由薄层层析得到的样
品
已经达到色谱纯的要求,可以用于结构鉴定。
3
含量测定
< br>薄层扫描法可以用于天然提取黄酮类化合物定量分析,该方法操作简便,结果可靠。王
亚娟等[
9
]
< br>采用双波长薄层色谱扫描法对蒲公英总黄酮的含量进行测定。于硅胶
G
薄层
板上,以醋酸乙酯
?
甲酸
?
水
(8
∶
1
∶
1)
为
展开剂展开后,测定波长
λs=278
nm
,参比波长
λR=356 nm
,
测得蒲公英总黄酮含量为
4.236%
。
4
活性成分筛选
生物自显影技术是将薄层色谱分离和生物活性测定相结合的药物筛选方法,
是一种快速
测定生物活性的手段[
10
]。何璐[
11
]
采用甲苯
?
氯仿
?
丙酮(
5
∶
5
∶
7
)的展开剂于硅
胶板分离甘草黄酮,并用生物自显影技术进行抗菌活性测定出了甘草黄酮中有抑菌活性成
分,该方法操作简单、耗费低、灵敏度高。
5
薄层层析条件选择
用于黄
酮类化合物薄层层析常用吸附剂是硅胶、
聚酰胺。
硅胶是一种极
性吸附剂,
一般
用于弱极性的游离黄酮
(
黄酮苷
)
;聚酰胺为氢键吸附,吸附
能力与酚羟基多少、位置及氢键
缔合力大小有关,鉴别黄酮类化合物适用范围广。葛明菊
[
12
]
利
用聚酰胺薄层层析分析
大血藤黄酮类化合物组成,药用部位嫩茎含有
Rf
值为
0.88
的斑点而在其他
部位无此斑点,
分析该斑点可能为药用成分。
卢端萍等
[
13
]
在硅胶
G
薄层板上以乙酸乙酯
?
甲酸
?
水
(67
∶
13
∶
20)
展开结果表明葫芦茶中含芦丁成分。黄酮苷类化合物极性强于游离黄酮,如与
文献
[
13
]相比,王怀冲[
14
]在硅胶
G
薄层板
上鉴别贯叶连翘中黄酮苷类
(
金丝桃苷
)
的存在,
以极性大的展开剂醋酸乙酯
?
丁酮
?
甲醇
?
水
(5
∶
3
∶
1
∶
1)<
/p>
展开得到了很好的分离效果。对
于既有较强极性的化合物,
又有较弱极性成分的混合样品中,
可以采用二次或双向展开。
所
以鱼藤抽提液中的黄酮类化合物
[
15
]在硅胶
H
? CMC
薄板上用微量圆环技术快速而有
效
地找到了适合的展开剂,采用双向展开得到了
8
个斑点,即以氯
仿
?
丙酮
?
醋
酸溶剂在竖
直方向展开,再用甲苯
?
氯
仿
?
丙酮溶剂在水平方向展开。含有多种极性成分的黄酮类化合
物分离鉴别时可选用聚酰胺。刘嘉宝等
[
16
]
<
/p>
将聚酰胺薄层板以醋酸乙酯
?
甲醇
?
甲酸
?
水(
25
∶
1
∶
3
∶
23
)为展开剂,
紫外分析仪下检视。供试液在以芦丁、槲皮素、黄芩甙各
标准液的相应位置出现相同的颜
色斑点,它们的比移值
Rf
分别为
0.
46
、
0.20
和
0.16
。因
而可作定性分析的依据,
说明云南松花粉中主要含有黄酮类黄芩苷、
黄酮醇类芦丁及槲皮素
< br>3
种成分。其他用于黄酮化合物薄层层析的吸附剂有纤维素、氰基
?
硅胶等,纤维素用于分
离极性强成分,氰基
?
硅胶对于含不同极性成分或极性未知的黄酮化合物分离效果较佳
[
17
]。
随着天然产物研究的不断发展,
薄层层析技术也不断提高,
p>
向着更准确更灵敏的方向发
展。
含表面活性
剂的缔和胶体的展开剂在对黄酮类化合物分离鉴别中表现出了传统展开剂所
不能苟同的优
势,
因此逐渐引起了人们的研究兴趣。
目前应用的主要有胶束体
系和微乳体系。
林辉概等[
18
]以<
/p>
4
%氯化十四烷基二甲基苄铵(
Zeph
)、乙酰丙酮和水
(5
∶
1
.
5
∶
< br>1
.
5)
溶液为流动相,
聚酰胺薄膜为固定相的胶束体系较好地分离了槲皮素、
桑色素和芦丁,
均达
到了完全分离的效果。微乳体系与胶束体系相比,以其具有
更大的增溶量和超低界面张力
[
19
]
的特点而在黄酮类化合物的研究中广泛应用。目前微乳体系主要组成是十二烷基硫
酸钠<
/p>
?
正丁醉
?
正庚
烷
?
水。
马柏林等
[
20
]
以上述微乳体系展开剂按
(11.7
∶
15.6
∶
2.7
∶
70)
的比例组成的
o/w
型微乳液,适合于大多数黄酮
完全分离。冯颖等[
21
]对比以聚酰胺为
固定相,微乳液为展开剂和以硅胶
GF254
为固定相,氯
仿
?
甲醇
?
水
(
体积比
6
∶
4
∶
2)
下层
?
乙酸
(
体积
比
15
∶
1)
、醋酸乙酯
?
甲酸
?
< br>水
(
体积比
8
< br>∶
1
∶
1)
为展开剂的层析条件下进行薄
层层析,
结果表明以聚酰胺为
固定相,
微乳液为展开剂条件下,
无梗五加果总黄酮中各组分<
/p>
基本分离,斑点清晰,共得到
9
个组分。
injector-灰熊队
injector-灰熊队
injector-灰熊队
injector-灰熊队
injector-灰熊队
injector-灰熊队
injector-灰熊队
injector-灰熊队
-
上一篇:新版开心学英语四年级下册U4-U5练习卷
下一篇:音标及字母组合