refrigerant-亲爱的用英语怎么说
RGS4
在
HUEVCs
凋亡中的作用及地塞米松对其的影响
(
一
)
作者：陈星云，赵艳，李平，熊仁，刘苹，杨楠，周元国
【摘要】目的研究
RGS4
对常氧和低氧培
养条件下
HUEVC
细胞凋亡的
影响及
地塞米松在其中的作用，以探讨
RGS4
在
HUEVC
细胞凋亡中的
作用及地塞米松处理对其的影响。
方法采用
O2/N2/CO2
三气培养箱模
拟常氧和低氧条件培养
HUEVC
细胞，
< br>RGS4
真核表达载体转染
HUEVC
< br>细胞后采用流式细胞仪（
法）检测细胞凋亡。结
果常氧条
件下
RGS4
转染细胞和地塞米松处理对细胞凋亡无明显影响，
低氧培养条件下细胞凋亡增加
(P0.01)
< br>，
RGS4
转染后可使
HUEV
C
细胞凋
亡显著减少
(P0.01)<
/p>
，地塞米松和
RGS4
同时处理后
HUEVC
细胞的凋亡
与单纯
RGS4
转染无显著差别。结论
RGS4
不影响常氧条件下的
HUEVC
细胞凋亡，但可明显
抑制低氧条件下的
HUEVC
细胞凋亡，地塞米松抑
制细胞凋亡的作用可能与
RGS4
有关或者通过相
同的细胞信号通路抑
制低氧条件下的细胞凋亡。
【关键词】细胞凋亡地塞米松
RGS4
AbstractObjectiveTostudytheroleofRGS4inapoptosiso
fHUEVCsinnormoxiao
sHUEVCswerecultured
inthesimulatednormoxiaorhypoxiaofO2/N2/CO
2cellincubatorandweretran
sfectedwiththe
eukaryoticexpressionvectorofRGS4;theflowcytometer(
Anne
xin-V-FITC-PI)sThetransfectionofRGS
4andtreatmentofdexamethasonehadnoobviou
seffectontheapoptosisinnor
moxiawhilethe
apoptosisofHUEVCsincreasedinhypoxia(P0.01);theapop
tosis
ofHUEVCsdecreasedsignificantlyafte
rRGS4transfection(P0.01);theapoptosi
sof
HUEVCstreatedwithdexamethasoneandwithRGS4atthesame
timeshowe
sio
nsRGS4hasnoeffec
tontheapoptosisofHUEVCsinnormoxiabutitcaninhibitth
e
apoptosisofHUEVCsinhypoxia;theeffectof
dexamethasoneontheapoptosisof
HUEVCsispr
obablyrelatedtoRGS4,orRGS4anddexamethasoneemployth
esa
mecellsignalingpathwaywheninhibiting
theapoptosisofHUEVCsw.
KeywordsapoptosisdexamethasoneRGS4
急性肺损伤是肺脏炎症和肺微血管通透性增加的急性、进行性呼吸衰
竭，
其最终阶段即急性呼吸窘迫综合征。血管内皮细胞是连续性衬在
血管腔内面，
参与体内许多生理和病理生理过程，
如维持血管完整性、
< br>分泌和释放活性物质、维持血管张力等。在急性肺损伤过程中，肺微
血管的变化尤
为引人注目，内皮细胞受损被认为是急性肺损伤发生、
发展的病理基础。国内外多项研究
表明〔
1
～
4
〕
，急性肺损伤时内皮细
胞发生凋亡，从而导致肺血管内皮－上
皮屏障受到破坏，导致血管通
透性增加，引起肺水肿和气体交换障碍，地塞米松可以抑制
血管内皮
细胞的凋亡〔
6
，
7
〕
，减轻肺损伤。
<
/p>
本研究拟采用
HUEVC
内皮细胞株，采
用常氧和低氧培养，观察
RGS4
表达质粒转染后皮细胞凋亡和
地塞米松处理后内皮细胞凋亡的变化，
以阐明
RGS4
在内皮细胞凋亡中的作用以及地塞米松处理对其的影响。
1
资料与方法
1.1
主
要
试
剂
质
粒
：
R
GS4inpcDNA3.1(+)(RGS0400000
，
GUTHRIEcDNAResourceCenter
，
美国
)
，
pcDNA3.1(+)
，
质粒大量抽提试剂
盒
(dMaxiprepKit
，
Omega)
< br>，
LifofectaminPlusTMReagent(Invitroge
n
，美国
)
。
1.2
实验分组及指标检测时相点（
1
）常氧实验分组：
1)
空白对照组：<
/p>
(controlN1)
；
2)pcDN
A3.1(+)
组：
(
转染
pcDNA3.1(+)
空质粒，
cotrolN
2)
；
3)RGS4
转染组：
(
转染
RGS4
表达质
粒，
RGS4N)
；
4)RGS4
转染＋地塞米
松处理组
(RGS4
＋
DEXN)
；
（
2
）
低氧实验分组
(1
％
O2
／
5
％
CO2
／
94N2
％
)
：
1)
空白对照组：
(controlH1)
< br>；
2)pcDNA3.1(+)
组：
(
转染
pcDNA3.1(+)
空
质
粒，
cotrolH2)
；
3)RGS4
转染组：
(
转染
RGS4
表达质粒，
RGS4H
)
；
4)RGS4
转染＋地塞米松处理
组
(10
－
7M)(RGS4
＋
DEXH)
（
3
）检测时相点：流式
细胞仪检测细胞凋亡分别于低氧处理后
6
小时、
24
小时和<
/p>
48
小时测定。
1.3RGS4
以及
pcDNA3.1(+)
质粒的扩增与提取常规方法扩增
RGS4
与
pcDNA3.1(+)
质粒并采用质粒提取试剂盒提取质粒以用于转染<
/p>
1.4HUEVC
细胞的培养取液氮中
冻存的
HUEVC
细胞株，迅速放入
4
0
℃
水浴中，快速溶解细胞。超净工作台内将细胞悬液移入离涯
管中，滴
加
DMEM
培养基至
8
毫升，
洗涤细胞。
2
000
转、
离心
5
分钟、
弃上清，
用
DEME
再次洗涤沉淀。
沉淀用
DEME
培养基＋小牛血清悬浮
+3%
内皮
< br>细胞生长因子，移入到细胞培养瓶中培养备用。
1.5
质粒转染
(Lipofectamineplus
法
)
细胞接种，
6
孔板常规接种
2×105
细